Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему Токсокароз собак ВАК РФ 03.00.19, Паразитология || Токсокароз собак курсовая

Эпидемиология

Инвазия токсокарами широко распространена среди животных и людей. Пораженность псовых, основных хозяев токсокар, во всем мире очень высока и достигает в отдельных регионах 90%. Рост числа собак в городах, высокая экстенсивность их инвазии токсокарами, значительная плодовитость гельминтов и устойчивость яиц во внешней среде — определяющие факторы широкого распространения этого гельминтоза.

Зараженность людей токсокарами варьирует от 2,6% в Бельгии до 80% на Карибских островах. В России, по данным эпидемиологических и серологических исследований, инвазировано до 0,5 млн человек, зараженность варьирует до 21,5%. Наблюдают ежегодный рост заболеваемости, особенно у детей в сельской местности.

Источник инвазии для человека в синантропном очаге — собаки (редко кошки), обсеменяющие почву яйцами гельминтов. Люди не могут быть источником заражения, так как в организме человека паразит не достигает половозрелой стадии и не выделяет яйца во внешнюю среду.

Существует несколько путей заражения животных:

  • внутриутробное заражение щенков через плаценту инвазированной беременной суки (трансплацентарный путь);
  • заглатывание собаками инвазионных яиц с обсемененной яйцами токсокар почвы (пероральный путь);
  • через молоко кормящей собаки (трансмаммарный путь);
  • поедание собакой тканей паратенических (резервуарных) хозяев.

Яйца гельминтов, выделяемые собаками, созревают до инвазионной стадии в почве. Оптимальная температура — 24-30 °С, влажность воздуха — 85%, почвы — 20% и выше. При этих условиях развитие личинки в яйце происходит в течение 5-8 сут.

Человек заражается при проглатывании яиц токсокар с пищевыми продуктами и водой. К группе риска относятся: дети 1,5-5 лет, контактирующие с почвой и собаками; дети, страдающие геофагией; люди, имеющие профессиональный контакт с животными и почвой (ветеринарные работники, сотрудники питомников, цирков, зоопарков, рабочие коммунального хозяйства, продавцы овощных магазинов, работники овощных баз); умственно отсталые и психически больные со склонностью к копро- и геофагии; владельцы приусадебных участков, домашних животных.

Единственным резервуаром и источником инфекции являются собаки и кошки. Практически все бродячие животные этих семей являются зараженными. Однако особенности дефекационный привычки кошек вызывают значительно меньшее возможность заражения людей. Механизм передачи является фекально-оральный, частый путь — контактно-бытовой. Восприимчивость людей высокая, наибольшую заболеваемость регистрируют среди детей, иммунитет не просветленный.

Для котов существует дополнительный путь заражения — при поедании мышей и крыс, которые являются резервуарными хозяевами личинок токсокар.

Возбудители инфекции — нематоды токсокары собак Toxocara canis (Werner, 1782) и токсокары кошек Toxocara cati (син.: Toxocara mystax) (Zeder, 1800), семейство Toxocaridae, отряд Ascaridida.

Toxocara canis: самцы длиной 99—127 мм, самки — 126— 198 мм, паразитируют в тонкой кишке и желудке собаки, шакала, волка, лисиц, песцов и других животных семейство псовых.

Toxocara cati: самцы длиной 30—70 мм, самки — 40—100 мм, паразитируют в тонкой кишке и желудке кошки, рыси, леопарда и других животных семейство кошачьих.

Яйца токсокар обоих видов округлой формы, длиной 0,065—0,077 мм, неотличимы друг от друга, очень устойчивы к воздействиям окружающей среды и могут сохраняться жизнеспособными в почве несколько лет.

У животных из проглоченных инвазионных яиц в кишечнике выходят личинки, которые внедряются в стенку тонкой кишки и по кровеносной системе попадают в лёгкие. Часть из них затем выходят в просвет трахеи и бронхов, с мокротой заглатываются вновь и в кишечнике достигают половозрелости; на 25—28-й день с начала заражения самки гельминтов откладывают яйца, которые с испражнениями попадают в окружающую среду. Часть личинок, проникших в капилляры лёгких, стоком крови заносится в различные органы и ткани, где инкапсулируется.

Человек заражается при проглатывании инвазионных яиц токсокар с пищей и водой, загрязненными испражнениями животных, а также при контакте с заражёнными домашними животными.

Источник инвазии для человека — собаки, загрязняющие почву яйцами паразита, которые выделяются с фекалиями. Больные люди не являются источником инва­зии, так как в организме людей цикл развития неполный и половозрелые формы гельминта не образуются. Инфицированность собак Toxocara canis в среднем составляет 15,2%. Бродячие собаки заражены в 13 раз чаще домашних. Больные собаки загрязняют дворы, где играют дети, что обусловливает заражение человека[2].

В России, где прекратилась борьба с бродячими собаками, наблюдается рост заболеваемости токсокарозом. Например, в 2000 году заболеваемость токсокарозом в России увеличилась в 2 раза по сравнению с 1999 годом и в 80 раз по сравнению с 1991 годом[3].

Определённую роль в распространении яиц паразитов играют синантропные насекомые — главным образом тараканы.

У человека Toxocara canis паразитируют только в личиночной стадии, а Toxocara cati — в личиночной и изредка в половозрелой (имагинальной) стадиях.

Реже человека поражают другие виды токсокар: Токсокара pteropodis и Токсокара vitulorum (паразит рогатого скота).

История

Собачья Токсокара была впервые описана в 1782 году немецким исследователем П. Вернером, а кошачья — в 1788 г.. Немецким биологом Ф. фон Шранка. Название рода Toxocara происходит от греч. Toxon — «лук» и греч. Cara — «голова». Только в 1952 американские паразитологи во главе с П. Бивер описали случаи заболевания людей, подтвердив в них наличие личинок собачьей токсокары и дав название «Visceral larva migrans» — синдром висцеральной личиночной миграции.

В 1978 американский инфекционист и паразитолог Ч. Ф. ван Рейн вместе с П. Бивер и другими соавторами систематизировали немногочисленные на тот момент в мировой медицинской литературе описания случаев заражения людей Toxocara cati, предоставив и свои наблюдения, где этим авторам удалось впервые выделить личинки кошачьей токсокары от больных людей.

Патогенез

В кишечнике человека из яиц выходят личинки размером 0,1-0,2 мм. Они перфорируют стенку кишки и проникают в лимфатические и кровеносные сосуды и заносятся во все органы и ткани: печень, легкие, глаза, селезенку, скелетные мышцы и головной мозг. Попав в мелкие капилляры (диаметром 0,02 мм), личинки застревают в паренхиме органа, где задерживаются, сохраняя жизнеспособность в течение многих месяцев и лет. При ослаблении защитных сил организма возможны их активизация и дальнейшая миграция по организму. Постепенно личинки инкапсулируются и погибают.

Морфологически токсокароз — эозинофильный гранулематоз как проявление аллергической реакции замедленного типа. В центре гранулемы находится очаг некроза, по периферии — большое количество эозинофилов, гистиоцитов, нейтрофилов, макрофагов, лимфоидных и эпителиоидных клеток. Многочисленные гранулемы расположены в:

  • печени,
  • легких,
  • поджелудочной железе,
  • миокарде,
  • мезентериальных лимфатических узлах,
  • головном мозге,
  • глазах.

При миграции личинки травмируют ткани, вызывают геморрагии, некрозы, могут быть проводниками и инокуляторами патогенной микрофлоры.

Ведущую роль в патогенезе токсокароза играет сенсибилизация организма продуктами жизнедеятельности гельминта: метаболитными и соматическими антигенами с развитием реакции гиперчувствительности. Повышенная продукция специфических антител класса IgE приводит к активации тучных клеток, базофилов, нейтрофилов и высвобождению ими ряда медиаторов — гистамина, простагландинов, лейкотриенов, ответственных за аллергические реакции немедленного типа.

Активация Тh2-клеток, нарастание ИЛ-5, ИЛ-3, GM-CSF (колониестимулирующего фактора) способствуют активации эозинофилов, увеличению их количества в сосудистом русле и тканях. Эозинофилы концентрируются в местах локализации личинок токсокар, где разрушаются и высвобождают гранулы, содержащие ферменты.

Генерация активных радикалов кислорода и продукция катионных белков делают эозинофилы центральным повреждающим фактором при накоплении их в тканях. Сенсибилизированные Т-лимфоциты, скопившиеся вокруг личинки, выделяют лимфокины, привлекают макрофаги и другие клетки, которые включаются в процесс формирования гранулем.

Самки токсокар ежедневно выделяют яйца, которые, попадая с фекалиями пораженных животных в окружающую среду, сохраняют свою жизнеспособность в течение многих месяцев, иногда несколько лет. При благоприятных условиях окружающей среды (в теплый период года) через 1-3 недели в яйцах токсокар развивается личинка.

Плотоядные животные заражается токсокарозом, проглотив такие яйца. В пищеварительном канале из созревших яиц токсокар под действием желудочных и кишечных соков разрушаются оболочки яиц и вылупляются личинки. Током крови они заносятся в печень, затем в легкие и снова попадают в тонкую кишку, где развиваются во взрослого гельминта — токсокарами.

Учитывая, что личинки токсокар попадают в кровь, заражение животных этим гельминтом может происходить внутриутробно, а также через молоко самок. Наибольшее количество личинок в молоке самок оказывается на вторую неделю лактации (выработки из молочных желез молока). При заражении беременной животные личинки токсокар с кровью матери проникают в кишки плодов, остаются там до рождения приплода и там же вырастают до половозрелой стадии. С молоком зараженной матери личинки попадают в кишки щенков, котят и тому подобное.

Токсокароз у людей

Как только яйцо токсокары попадает в кишечник человека, оно избавляется оболочек, выпуская изнутри инвазионных личинок. Личинку можно увидеть только под микроскопом, потому что она меньше 0,5 мм. Личинки быстро проникают в стенку кишечника и мигрируют через сосуды в печень, легкие, мышцы, а иногда и в глаза и мозг.

Тяжесть заболевания зависит не только от величины инфекта, но и от степени аллергической реакции на личинки. У пациентов с атопическим болезнями токсокароз может протекать очень тяжело. Патологические проявления являются результатом воспаления, вызванного иммунным ответом, направленным против антигенов личинок.

Эти антигены принадлежат к внешнему покрытию личинки, слои которого легко отшелушиваются, когда на них действуют специфические антитела. Эти антигены обладают мощным аллергенным потенциалом. Воспалительная реакция приводит к покрытию личинки эпителиоидными клетками и, впоследствии, плотной фиброзной капсулой вроде гранулемы.

Хотя основные клинические проявления зависят от уровня поражения внутренних органов, наиболее общей характеристикой токсокароза является хроническая эозинофилия. Другие проявления обусловлены набором и степенью поражения органов личинками. При повреждении печени отмечается гепатомегалия, повышение температуры тела, боль в животе.

При поражении легких происходят легочные симптомы (например, одышка, кашель, стеснение в груди), бронхоспазм, интерстициальный пневмонит, а, иногда, и плеврит. Глазной токсокароз может вызвать снижение остроты зрения, увеит, гранулематоз сетчатки, эндофтальмит. Если есть повреждения ЦНС, имеют место неврологические проявления, в том числе, эпилептиформные припадки.

Пораженный гельминтами молодняк часто отстает в росте, теряет массу тела, у животных наблюдается плохой аппетит или даже его отсутствие, живот как правило увеличен. Больные животные слабые, малоподвижны, у них возникает воспаление бронхов и легких, животные кашляют, появляется одышка. Возможны кишечные колики, судороги, рвота с выделением токсокар.

Токсокароз согласно МКБ-10 относят к подклассу «Другие гельминтозы» (В83) в шифре «Висцеральная форма болезни, вызванная миграцией личинок гельминтов» (В83.0). Различают основные клинические варианты течения токсокарозу:

  • У маленьких детей часто токсокароз протекает субклинически;
  • Висцеральный синдром мигрирующих личинок происходит в результате воспалительной реакции в ответ на циркуляцию паразитов. Протекает с лихорадкой, кашлем, бессонницей, болями в животе, головной болью, гепатомегалией, лимфаденитом, иногда развитием плеврального выпота. Нередкая хроническая крапивница. В тяжелых случаях может развиваться миокардит с острой сердечной (ГСН) или острой дыхательной недостаточностью (ОДН)
  • Миграция личинок в заднюю часть глаза, как правило, происходят в старших детей и взрослых. Пациенты жалуются на снижение зрения, покраснение глаз или лейкокория (белый цвет зрачков). В сетчатке находят гранулемы, хориоретинит и хориоидеи. Гранулемы часто встречаются на макуле. Нередко потеря зрения односторонняя, на месте поражения происходит фиброз и отслоение сетчатки.

У человека различают личиночный (висцеральный) токсокароз и имагинальный (кишечный) токсокароз.

Попавший в организм человека и вышедшие из яиц личинки после миграции из кишечника через стенку кишки по кровеносным сосудам попадают в различные органы и ткани, где инкапсулируются, сохраняя длительное время биологический активность и вызывая личиночный токсокароз.

У людей в отличие от животных личинки попадают вновь в кишечник очень редко (и только личинки токсокар кошек); там они превращаются в половозрелую особь — имаго и вызывают имагинальный токсокароз.

Заболевание характеризуется тяжёлым, длительным и рецидивируюищим течением, полиморфизмом клинических проявлений, что объясняется миграцией личинок гельминтов по различным органам и тканям.

В проксимальном отделе тонкого кишечника из яиц выходят личинки, которые через слизистую оболочку поникают в кровоток, затем заносятся в печень и правую половину сердца. Попав в лёгочную артерию, личинки мигрируют и переходят из капилляров в лёгочную вену, достигают левой половины сердца после чего разносятся артериальной кровью по органам и тканям человека.

Мигрируя, личинки достигают места, где диаметр сосуда их не пропускает (диаметр личинки 0,02 мм), и здесь они покидают кровяное русло.

Личинки оседают в печени, лёгких, сердце, почках, поджелудочной железе, головном мозге, глазах и т. д., где ещё в течении месяцев и даже лет сохраняют жизнеспособность.

Личинки, осевшие в тканях, пребывают в «дремлющем» состоянии, а затем могут активизироваться и продолжить миграцию. С течением времени часть личинок инкапсулиpуется и постепенно разрушается внутри капсулы.

Токсокароз протекает как острая инфекция с лихоpадкой, лимфаденопатией, лёгочным синдромом, увеличением печени и высокой эозинофилией периферической крови[4].

Гистоморфологически токсокароз представляет собой диссеминированный эозинофильный гранулематоз как проявление аллергической реакции замедленного типа.

Toxocara в организме человека могут выживать до 10 лет, благодаря выделению личинкой маскирующей субстанции, способной защитить паразита от агрессии эозинофилов и антител человека при помощи сложной реакции, в результате которой предотвращается их контакт с эпикутикулой личинки.

Токсокароз негативно сказывается на ходе беременности[5].

Личиночный токсокароз регистрируются во многих странах мира. Встречается в любом возрасте, чаще у детей 1—4 лет. Клинические, картина зависит от интенсивности инвазии. При слабой инвазии отмечаются кожный зуд, рецидивирующая крапивница, бронхит и эозинофилия. При массивной инвазии болезнь протекает тяжело и проявляется рецидивирующей лихорадкой, гепатоспленомегалией (или только спленомегалией), бронхопневмонией с приступами кашля и бронхиальной астмы, высыпаниями на коже, одутловатостью лица, образованием в различных органах специфических гранулем, содержащих личинки токсокар.

Возможен токсокарозный офтальмит с поражением заднего сегмента глаза (хориоретинит), в результате чего может наступить слепота. Описаны случаи кератита. Длительность болезни от нескольких месяцев до нескольких лет. Диагноз ставится на основе клинические, картины. Определенную ценность имеют серологический методы исследования — реакция непрямой гемагглютипации и реакция энзим-меченных антител с токсокарозным антигеном, гиперглобулинемия, стойкая длительная эозинофилия — до 70—90% и РОЭ до 50 мм/час.

Актуальность

Распространение токсокароза среди собак и кошек наблюдается во всех климатических зонах, кроме районов Севера Евразии и Америки, где климат не способствует развитию яиц паразита в заразной стадии (личинок). Исследования показали, что собаки наиболее поражаются токсокарами в возрасте до 1 года (в 88% случаев).

Это объясняется внутриутробным путем передачи инвазии, а также через молоко самки при кормлении щенков. Наибольшая пораженность взрослых собак токсокарозом наблюдается среди блуждающих собак (почти в 2 раза выше, чем среди сельских). Заболевания животных токсокарозом сопровождается интенсивным выделением яиц токсокар в окружающую среду и приводит к загрязнению ими земли, которая является ведущим фактором передачи этого гельминта.

При обследовании городских и сельских почв было установлено, что они больше загрязнены во дворах многоэтажных домов. Это связано с постоянным выгулом домашних собак, а также с ночным нашествием блуждающих животных. В сельской местности наличие яиц токсокар в земле индивидуальных усадеб зависит от содержания в них пораженных животных.

Загрязненность приусадебных участков яйцами токсокар приводит к контаминування ними выращиваемых сельскохозяйственных культур (огородной зелени, овощей, ягод), которые являются одним из основных факторов передачи болезни человеку. Загрязнение яйцами токсокар территорий детских садов и школ обусловлено возможностью проникновения на них собак и кошек.

Этому способствуют отсутствие или неисправность ограждения, наличие в ней дыр и щелей. В мире токсокароз среди людей встречается везде, где рядом с людьми живут собаки и коты. Зараженность людей колеблется от 7% населения в развитых странах, и до 40% в развивающихся странах. Львиную долю составляют поражения, вызванные собачьей токсокарами.

Симптомы

Для токсокароза характерно длительное (до нескольких лет), рецидивирующее течение. Клинические рецидивы обусловлены периодическим высвобождением личинок паразита из гранулем и возобновлением их миграции. Различают висцеральную и глазную формы токсокароза.

Висцеральный токсокароз протекает в 2 вариантах: инаппарантном и клинически выраженном.

Висцеральный токсокароз регистрируют преимущественно у детей в возрасте 1,5-4 лет, взрослые заболевают реже и болеют легче. Мальчики инвазируются в 2 раза чаще, чем девочки, вероятно, из-за более активного контакта с почвой, пикацизма (стремления брать в рот землю).

Выделяют острую и хроническую стадии инвазии. Заболевание часто начинается остро, без продромального периода, лишь в редких случаях наблюдают короткий период легкого недомогания. Основные клинические симптомы острой стадии: рецидивирующий подъем температуры тела, лимфаденопатия, легочный синдром, увеличение печени, реже селезенки, кожные высыпания в виде крапивницы или полиморфной сыпи, отек Квинке.

Температура тела чаще субфебрильная, обычно повышается в полдень или вечером, сопровождается познабливанием, а при снижении — обильным потоотделением. Наблюдают инъекцию сосудов конъюнктивы.

Поражение бронхолегочной системы отмечено у 20-50% больных с разнообразием клинических проявлений: катаральным воспалением дыхательных путей, бронхитом, пневмонией, бронхообструктивным синдромом.

Классический вариант — эозинофильная пневмония (синдром Леффлера). У больных детей возникают приступы кашля, чаще в ночное время, нередко приступы удушья с тяжелой одышкой, цианозом. При аускультации выслушивают сухие, свистящие хрипы — единичные или по всей поверхности легких, иногда очаги влажных хрипов.

В крови — гиперлейкоцитоз до 70х109/л, гиперэозинофилия — до 90%. При рентгенологическом исследовании выявляют «летучие» инфильтраты, пневмонию, усиление легочного рисунка, иногда с характерными просовидными очагами (симптом снежной метели), интерстициальные изменения, ателектазы. При исследовании функции внешнего дыхания выявляют признаки бронхообструкции: снижение ОФВ1 (объем фор сированного выдоха за 1 секунду), индекса Тиффно, средней объемной скорости выдоха.

Известны редкие случаи эозинофильной пневмонии с летальным исходом; возможен стойкий бронхообструктивный синдром с исходом в бронхиальную астму.

С абдоминальным синдромом токсокароз протекает у 60% больных. У детей ухудшается аппетит, снижается масса тела, появляются боли в животе, тошнота, рвота, метеоризм, диарея. Редко развивается эозинофильный гастроэнтерит.

Типичный признак токсокароза — гепатомегалия у 40-80% больных с увеличением печени на 2-4 см, иногда до значительных размеров. Увеличение селезенки отмечено у 20-40% больных. При тяжелом течении возможен гепатит с повышением активности аминотрансфераз, реже — с признаками холестаза.

При УЗИ печени регистрируют линейные структуры повышенной эхоплотности, округлые очаги пониженной плотности, очаги кальцинации, увеличение лимфатических узлов в воротах печени, селезенки, парааортальных лимфатических узлов. При гистологическом исследовании пункционного биоптата печени обнаруживают эозинофильную инфильтрацию стромы, эозинофильные гранулемы, иногда картину острого гепатита иммунной природы.

Увеличение лимфатических узлов отмечают у 60-70% детей, иногда значительное увеличение лимфатических узлов подчелюстной и шейной областей, ворот печени, селезенки. Пальпируемые лимфатические узлы болезненные, подвижные, без воспалительных изменений.

Поражение сердца вызвано миграцией личинок гельминта в миокард или аллергической реакцией на антигены токсокар. В остром периоде наблюдают тахикардию, глухость сердечных тонов, систолический шум, расширение границ сердца. На ЭКГ выявляют диффузные изменения миокарда, иногда нарушения ритма. Возможен миокардит токсико-аллергической природы.

Описаны случаи синдрома Леффлера II — эозинофильного васкулита с пристеночным эндокардитом, развитие фибропластического эндокардита. В результате инфильтрации эндокарда и миокарда эозинофилами наступает фиброз эндокарда с рестриктивной кардиомиопатией. Поражение папиллярных мышц и хорд приводит к клапанной недостаточности. Эндокардит осложняется пристеночным тромбообразованием, тромбоэмболией.

Поражение ЦНС встречают нечасто. В острой стадии больные жалуются на головную боль, бессонницу, раздражительность. В тяжелых случаях инвазии аблюдают менингоэнцефалит, арахноидит, рецидивирующий миелит. Признаки общемозговых и очаговых поражений головного и спинного мозга: парезы, параличи, генерализованные и фокальные судороги, различные нарушения психики.

Кожные поражения возникают у каждого четвертого больного токсокарозом как единственное проявление инвазии: узловатая эритема, мелкопапулезная сыпь, крапивница. Иногда появляются рецидивирующие болезненные образования под кожей в области поясницы и конечностей. При их биопсии выявляют инфильтрацию дермы с большим количеством эозинофилов и гигантских клеток.

Поражение мышц — редкое проявление инвазии: иногда наблюдают миалгии, усиливающиеся при физической нагрузке, ходьбе, болезненность мышц при пальпации, их уплотнение.

Реактивные артриты, васкулиты при токсокарозе редки и, вероятно, связаны с отложением иммунных комплексов в синовиальной оболочке суставов, сосудистой стенке. В клинической картине отмечают артралгию, моноартрит, тромбофлебит, васкулит, кожные поражения (пурпуру Шенлейна-Геноха).

Поражение других органов и систем: вовлечение щитовидной железы протекает с симптомами объемного образования; развиваются реактивный панкреатит, поражение почек разной степени тяжести, эозинофильный гранулематоз кишечника.

Одно из постоянных проявлений висцерального токсокароза — стойкая, длительная эозинофилия кровивплоть до эозинофильной лейкемоидной реакции. Относительная эозинофилия — 30-90%, общее число лейкоцитов — 15-20х109/л, иногда — 80-100х109/л; СОЭ повышена. При длительном течении снижен гемоглобин. В белковом спектре — гипергаммаглобулинемия, характерно повышение общего IgE.

Хроническая стадия токсокароза протекает с периодами ремиссий и обострений от нескольких месяцев до нескольких лет. Зарегистрированы редкие летальные исходы, обусловленные усилением аллергических реакций, поражением миокарда, ЦНС, легких.

Инаппарантный (бессимптомный) токсокароз проявляется кратковременным виражом противотоксокарозных антител в низких титрах

(1:400-1:800) без клинических проявлений инвазии. У некоторых больных при объективном обследовании обнаруживают небольшое увеличение периферических лимфатических узлов, инъекцию конъюнктив, увеличение печени на 1-2 см. В периферической крови — эозинофилия 6-18% при нормальном лейкоцитозе.

Глазная форма токсокароза редко сочетается с висцеральными поражениями и развивается преимущественно у детей старше 12 лет и взрослых. Чаще поражается сетчатая оболочка, собственно сосудистая оболочка; хрусталик с воспалением и специфическими гранулемами. Обычно страдает один глаз, но возможно и двустороннее поражение.

Клинически наблюдают диффузный эндофтальмит, задний гранулематозный хориоретинит, папиллит, кератит, увеит, иридоциклит, эозинофильные абсцессы в плоской части цилиарного тела, катаракту. При тяжелом течении процесс прогрессирует до панофтальмита и отслойки сетчатки. Глазной токсокароз приводит к слепоте.

Клиническое наблюдение. Девочка, 1 год 7 мес, поступила с жалобами на сухой кашель с астматическим компонентом, общую слабость, плохой аппетит.

Анамнез: в возрасте 3 мес у ребенка появились сухой кашель с астматическим компонентом, одышка, субфебрилитет в течение месяца. Лечение отхаркивающими и отвлекающими процедурами не принесло улучшения. В анализе крови: лейкоцитоз — 26х109/л, эозинофилия — 52%, СОЭ — 48 мм/ч. Длительное лечение антигистаминными препаратами привело к исчезновению кашля и нормализации температуры тела.

При поступлении: общее состояние средней тяжести, температура тела — 39,6 °С, питание сниженное, кожа и слизистые оболочки бледные, на животе и нижних конечностях петехиальная сыпь. Подмышечные лимфатические узлы увеличены. Печень ниже края реберной дуги на 5 см, край острый, болезненный при пальпации, селезенка пальпируется по краю реберной дуги.

В анализе крови: НBG — 82 г/л, сегментоядерные нейтрофилы — 14%, эозинофилы — 65%, лимфоциты — 9%, моноциты — 3%, СОЭ — 48 мм/ч. Анализ мочи — без патологии. Биохимический анализ крови — без особенностей. На рентгенограммах грудной клетки — усиление легочного рисунка. Анализ кала: яйца и личинки гельминтов не найдены. При исследовании сыворотки крови с антигеном Toxocara canis выявлены антитела в титре 1:1024. Диагноз «висцеральный токсокароз».

Проведено лечение албендазолом в дозе 10 мг/кг массы тела в течение 5 дней, диазолином по 0,03 г 2 раза в день в течение 5 дней. После лечения температура тела снизилась до субфебрильных значений, печень уменьшилась на 2 см. Лейкоцитоз снизился до 20х109/л, эозинофилия — 37%. Через 10 дней проведен повторный курс тиабендазола в тех же дозах в течение 9 дней, одновременно — преднизолон по 10 мг/сут с постепенным снижением дозы.

Температура тела нормализовалась, исчезла сыпь, печень уменьшилась до нормы. Количество эозинофилов — 5%, WBC — 13х109/л. Девочку выписали домой в удовлетворительном состоянии. Под наблюдением находилась в течение года. Печень и селезенка не увеличены. В анализе крови: WBC — 8,9х109/л, эозинофилы — 14%. Реакция с антигеном Toxocara canisотрицательная.

Этиология

Toxocara canis и Toxocara cati является глистные видами рода Toxocara, семьи Toxocaridae, порядка Ascaridida, типа Nematoda. Это круглые гельминты длиной от 30 до 120 мм и диаметром около 2 мм. Половозрелые лице Toxocara canis бессимптомно живут в кишечнике собачьих, достигая иногда и 18 см в длину.

У щенков массивная инвазия может привести к смерти животного. Из кишечника выделяются уже инвазионные яйца, которые широко контаминують большое количество объектов внешней среды. Яйца сохраняют инвазийнисть годами. Практически идентичным названном жизненный цикл Toxocara cati, единственной существенной разницей является то, что эта Токсокара живет только в кишечнике кошачьих.

Диагностика

Дифференциальную диагностику токсокароза следует проводить с паразитарными инвазиями и большой группой заболеваний непаразитарной природы, сопровождаемых повышением эозинофилов в периферической крови.

Дифференциальную диагностику проводят с миграционной стадией гельминтозов человека (аскаридозом, стронгилоидозом, шистосомозами, описторхозом, клонорхозом, филяриозами); из непаразитарных заболеваний — с лимфогранулематозом, злокачественной лимфомой, синдромом Леффлера, синдромом Лефргена, болезнью Леттерера- Сиве, болезнью Франклина, эозинофильной гранулемой, узелковым периартериитом, хроническим миелолейкозом, миелофиброзом, полицитемией, семейной эозинофилией, первичным эозинофильным синдромом, болезнью Аддисона, герпетиформным дерматитом Дюринга, аденомой поджелудочной железы, гипернефромой.

Диагностика токсокароза представляет определенные трудности, поскольку клиническая симптоматика малоспецифична, а паразитологические методы для прижизненной диагностики практически не используются из-за отсутствия возможности обнаружения мигрирующих личинок и сложности их идентификации по гистологическим срезам.

1) определить показания к обследованию;

2) оценить эпидемиологический анамнез;

3) провести клиническое обследование больного;

• повышенное содержание эозинофилов в периферической крови неясного генеза;

• острое заболевание органов дыхания (бронхит, пневмония, трахеит), протекающее с гиперэозинофилией;

• рецидивирующие заболевания органов дыхания, сопровождаемые гиперэозинофилией;

• синдром рецидивирующих болей в животе неясного генеза, сопровождаемый астеническим синдромом, повышенным содержанием эозинофилов в периферической крови;

• аллергические заболевания с повышенным содержанием эозинофилов в периферической крови и/или повышенным содержанием общего IgE.

• наличие собаки в доме или на приусадебном участке (учитывают пол собаки, возраст, наличие щенков, особенности выгула, проводимое противопаразитарное лечение);

• наличие огорода вблизи жилья;

• эпизоды геофагии у больного;

• игра ребенка в песочнице и другие контакты с землей;

• употребление в пищу немытых ягод, овощей, фруктов.

На основании клинических наблюдений в литературе предложена балльная система оценки клинических симптомов и лабораторных признаков при токсокарозе. Диагноз токсокароза считается обоснованным при сочетании симптомов и показателей, в сумме превышающих 12 баллов.

Диагностическая ценность клинико-лабораторных показателей при токсокарозе

Показатель

Диагностическая ценность, баллы

Эозинофилия периферической крови

5

Лейкоцитоз

4

Увеличенная СОЭ

4

Гипергаммаглобулинемия

3

Гипоальбуминемия

3

Анемия

2

Рецидивирующая лихорадка

3,5

Серологические методы — ведущие методы лабораторной диагностики токсокароза. Диагностически значим для висцерального токсокароза (при использовании ИФА) титр 1:800 и выше, для глазного токсокароза — 1:400 и выше. Титр 1:200-1:400 свидетельствует об инвазии. Таким пациентам необходима консультация окулиста, при отрицательных результатах осмотра — повторное обследование каждые 3 мес.

Для оценки сроков инвазии (острой и хронической стадий) в профильных учреждениях используют определение авидности антител. Низкая авидность IgG к токсокарам (индекс — до 35%) — маркер острой стадии инвазии, высокая (выше 40%) — маркер хронической стадии.

При бессимптомном токсокарозе, сопровождаемом повышением эозинофилов в периферической крови и низкими титрами антител к токсокарам, специфического лечения не проводят. Больные остаются под диспансерным наблюдением.

Лечение больных токсокарозом проводят амбулаторно или в стационаре. Детей до 3 лет и больных с тяжелыми формами инвазии лечат только в стационаре.

Перед лечением необходимо обследовать больного, выполнить клинический анализ крови, анализ мочи, ЭКГ, биохимическое исследование крови (общий белок, билирубин и его фракции, мочевина, АЛТ, АСТ, γ-ГТ, ЩФ, железо). Для лечения токсокароза используют производные карбаматбензимидазола.

• Албендазол внутрь взрослым в дозе 0,4 г/сут; детям — по 10 мг/кг массы тела в сутки в 2 приема после еды. Курс — 10 дней (5- 20 дней).

• Мебендазол внутрь взрослым в дозе 0,4 г/сут; детям — по 10 мг/кг массы тела в сутки в 2-3 приема после еды. Курс — 10-15 дней, затем перерыв 2 нед и повторный курс.

Эффективность противопаразитарных средств — около 50%, нередко неоходимо повторное лечение.

При необходимости проводят патогенетическое лечение. При высокой лихорадке показаны жаропонижающие средства, при выраженной бронхообструкции — бронхолитики (сальбутамол, фенотерол, ипратропия бромид, кромоглициевая кислота). Для купирования аллергических проявлений используют антигистаминные средства.

При тяжелом течении инвазии с полиорганными поражениями применяют глюкокортикоиды (преднизолон) по 1-2 мг/кг массы тела в сутки до улучшения состояния с последующей постепенной отменой препарата.

При клинических и лабораторных признаках нарушения иммунитета перед назначением противопаразитарных препаратов можно использовать иммунотропные препараты. Полиоксидоний (ампулы — 3 мг; свечи — 6 и 12 мг) внутримышечно в дозе 0,1-0,15 мг/кг 1 раз в сутки в течение 5-7 дней или ректально после очистительной клизмы на ночь в дозе 0,1-0,15 мг/кг 1 раз в сутки в течение 3 дней, затем 0,1-0,15 мг/кг массы тела 1 раз в сутки или ректально 1 раз в 2 сут — 7 свечей.

При пиогенных абсцессах печени и/или других бактериальных осложнениях дополнительно используют антибактериальные средства.

• осмотр больного — 1 раз в 2 мес;

• клинический анализ крови — ежемесячно;

• исследование крови на токсокароз — 4 раза в год;

• исследование функции внешнего дыхания (больным токсокарозом с легочным синдромом) — по клиническим показаниям в течение всего периода диспансерного наблюдения;

• консультация аллерголога (больным токсокарозом с легочным и кожно-аллергическим синдромом) — по клиническим показаниям в течение всего периода диспансерного наблюдения.

Остальные методы обследования определяют индивидуально для каждого больного в зависимости от клинической формы болезни. Больные висцеральным токсокарозом с легочным синдромом, семейный анамнез которых отягощен атопией, входят в группу риска бронхиальной астмы и должны находиться под наблюдением аллерголога.

Больные глазным токсокарозом должны быть под наблюдением врача-офтальмолога. Вопрос о специфическом лечении решается совместно врачом-офтальмологом и врачом-инфекционистом (педиатром, терапевтом).

С диспансерного учета снимают при исчезновении клинических симптомов и после 4-кратного падения титров антител в парных сыворотках.

В общем анализе крови часто стойка небольшая эозинофилия. В тяжелых случаях в крови высокое содержание IgE. У больных с гранулематоз легких при рентгенографии, компьютерной рентгеновской томографии обнаруживаются небольшие гранулемы, окруженные зоной затмение в виде «матового стекла», иногда определяется плевральной затмение.

Есть решающей, вызывает затруднения нахождения личинок токсокар в организме человека. Иногда их находят в операционном материале, изредка — в биоптатах печени. При токсокарозе глаза могут наблюдаться личинки в сетчатке при офтальмоскопическая исследовании. Главным направлением является использование ИФА.

Критериями ИФА является высокий титр специфических антител класса IgE и IgM, тогда как уровень IgG или даже его рост является лишь свидетельством попадания в организм человека в прошлом токсокар и не является показателем остроты процесса. Более специфическим считают имуноблотинг, который используют в развитых странах. Выявление антител к определенным белков токсокар достаточно чувствительным и специфическим результатом.

Профилактика

Профилактические мероприятия при токсокарозе следующие.

  • Мероприятия, направленные на источники инвазии: обследование и своевременная дегельминтизация собак, ограничение численности бродячих собак, оборудование специальных площадок для выгула собак и их гигиеническое содержание.
  • Влияние на факторы передачи инвазии: мытье рук после контакта с почвой и животными, тщательное мытье зелени, ягод, овощей, которые загрязнены землей, защита песочниц пленкой или щитами от посещения их животными, регулярная смена песка в детских песочницах (3 раза в год), защита парков и скверов от свободного выгула собак, обустройство площадок выгула и их гигиеническое содержание.
  • Санитарно-просветительная работа — разъяснение возможных путей заражения паразитами, методов лечения животных, необходимости устранения фекального загрязнения собаками во время их выгула.

Мероприятия, направленные на предотвращение заболевания людей токсокарозом, прежде всего предусматривают ликвидацию источника инвазии (пораженных животных), факторов передачи возбудителя (охрану окружающей среды от загрязнения яйцами токсокар) и выполнения элементарных гигиенических требований. Взяв в дом животное, ее необходимо проверить на наличие гельминтов.

В дальнейшем кошек и собак нужно регулярно, хотя бы 1 раз в год, обследовать и при необходимости своевременно лечить. Щенков рекомендуется обследовать с 14-18-дневного возраста. Собак следует выводить на прогулку в места, где играют дети. Места общего пользования, куда собаки и коты имеют доступ, должны быть ограждены от детских площадок.

Яйца токсокар, попавших в землю и созрели в ней за 1-3 недели при благоприятном температурном режиме (13-16 ° С) внешней среды, могут загрязнять овощи, огородную зелень, обувь и одежду детей, а в детских садах и школах — инвентарь и предмет потребления. Зелень, овощи и фрукты, употребляемые в пищу сырыми, необходимо тщательно мыть в проточной воде, а затем погружать на 3 сек. в кипяток.

Автореферат диссертации по теме «Токсокароз собак»

На правах рукописи

Михин Александр Германович

ТОКСОКАРОЗ СОБАК (ЭПИЗООТОЛОГИЯ, ИММУНОДИАГНОСТИКА, ПАТОМОРФОЛОГИЯ, ЛЕЧЕНИЕ)

03.00.19 — паразитология

16 00.02 — патология, онкология, морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Н. Новгород — 2004

Работа выполнена на кафедре анатомии и физиологии животных, в клинике и лаборатории паразитологии ФГОУ ВПО «Костромская государственная сельскохозяйственная академия».

Научные руководители: доктор биологических наук, профессор МД. Новак

заслуженный деятель науки Российской Федерации, доктор ветеринарных наук, профессор Э.Ф. Ложкин

Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Воронежский Государственный агроуниверситет им. К.Д. Глинки»

Защита диссертации состоится «17» июня 2004 г. в 14 часов на заседании диссертационного совета Д.220.047.02 в ФГОУ ВПО «Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия» (603107, Н. Новгород, проспект Гагарина, 97).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Нижегородской государственной сельскохозяйственной академии. Автореферат разослан » 13″ мая 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного Совета, доктор биологических наук, профессор

Заслуженный деятель науки РФ, д. вет. н., профессор, Э.Х. Даугалиева

д. мед. н., профессор В.П. Смирнов

Общая характеристика работы

Актуальность темы. Токсокароз широко распространен среди собак во многих странах мира (P.M. Schantz, 1989).

В крупных городах наблюдается непрерывный рост численности плотоядных. Инвазированные животные контаминируют окружающую среду яйцами токсокар. Яйца и личинки гельминтов проникают в организм специфических и неспецифических хозяев алиментарно, при каннибализме, трансплацентарно и трансмаммарно.

В различных регионах России токсокароз регистрируется у 10-76 % собак (Ф.Л. Радун, 1973, С.Д. Клочков, 1995, Ю.Э. Мысливец и др., 1998, АЯ. Лысенко и др., 1999, А.Н. Шинкаренко, 1999, Т.Г. Козырева, 1999,

A.Н.Воличев, 2000, СИ. Калюжный, 2000, Н.В. Есаулова, М.Ш. Акбаев, 2001,

B.Б. Игнатьева, 2001, И.М. Зубарева, 2001, А.В. Жабров, 2002, Н.С. Беспалова, 2003).

Щенки от 2 до 30 дней заражены токсокарами на 100 %. Высокая напряженность эпизоотического процесса является следствием пожизненного носительства личинок Тохосага canis и трансплацентарной передачей их во второй половине беременности (Л.Е. Верета, О.Г. Малышкова, 1984).

Токсокароз — зооноз. Зараженные собаки представляют эпидемическую опасность. Патологические изменения в тканях людей, вызванные личинками токсокар, известны под названием синдрома «larva migrans» (Г.А. Котельников, 1984, Ю.А. Березанцев, В.В. Кривенко, 1986).

Установлено, что личинки токсокар при миграции проникают в капилляры легких, затем в большой круг кровообращения, центральную нервную систему, обусловливая патологические процессы в головном мозге (К.И. Скрябин, А.М. Петров; 1964).

В Болгарии зарегистрировано 723 больных с мигрирующими личинками токсокар. Описан случай менингита, индуцированный Тохосага canis (Jeleva R. et al., 1998).

Известны две формы токсокароза человека: висцеральный и глазной. Заболевание протекает с рецидивами и длительными ремиссиями (Л.С. Ходасевич и др., 1998).

В России и за рубежом для сероэпидемиологического обследования на токсокароз предложен иммуноферментный метод и другие иммунодиагностические тесты. Антитела к личинкам токсокар обнаруживают в сыворотках крови людей при помощи тест систем для ИФА «Тиаскар» (НПО «Вектор бест», г. Новосибирск).

До настоящего времени недостаточно изучены особенности эпизоотологии, патогенез ларвального токсокароза собак, патоморфологические изменения в тканях, продолжительность персистенции и сохранения инвазионных свойств личинок токсокар у взрослых плотоядных.

За рубежом с 60-70 годов прошлого столетия применяются.различные иммунологические тесты для диагности ок роза.

В отечественной ветеринарной т эффективные

методы иммунодиагностики «larva migrans» при токсокарозе плотоядных.

В качестве источника антигена для иммунодиагностики ларвалъного токсокароза можно использовать взрослые особи Тохосага canis (C.C. Huntley et al., 1963, ЕД. Jeska, 1967, R.F. Collins et al., 1975), личинки второй и третьей стадий (J.N. Annen et а1.,Л975), экскреторно-секреторные продукты личинок (D.H. Savigny, 1975, К. Matsumura el al., 1983).

В работах отечественных и иностранных исследователей подчеркивается трудность, длительность и невысокая эффективность лечения синдрома «larva migrans» у человека и животных (Н. Тумальская, 1997, S. Coman et al., 2000). _

Актуальным для ветеринарной практики является научное обоснование комплексных профилактических и оздоровительных мероприятий при токсокарозе, включающих диагностические исследования и дегельминтизации собак перед наступлением беременности.

Цель я задачи исследований. Изучить особенности эпизоотологии токсокароза собак в г. Костроме, патоморфологические изменения в органах экспериментально зараженных токсокарами животных, разработать диагностические препараты из антигенов личиночных стадий Тохосага canis и адаптировать их для реакций непрямой гемагтлютинации и латексагглюти нации.

1. Изучить распространение, сезонную динамику и возрастные аспекты эпизоотологии токсокароза собак в г. Костроме, Костромском и Красносельском районах.

2. Разработать параметры культивирования яиц и получения экскреторно-секреторных, соматических антигенов из личинок Тохосага canis.

3. Определить специфичность и активность антигенных иммунореагентов из личинок Т. canis, установить чувствительность, информативность РНГА и динамику антител при экспериментальном токсокарозе собак.

4. Изучить гематологические показатели при экспериментальном токсокарозе собак в различные периоды инвазии после дегельминтизации фебантелом и альбендазолом.

5. Выяснить патоморфологические изменения в органах экспериментально зараженных токсокарами собак.

Научная новизна работы. Впервые изучено распространение токсокароза среди собак в г. Костроме. Установлены сезонная динамика, возрастные аспекты эпизоотологии токсокароза, уровень зараженности в городских и сельских условиях, гематологический статус и патоморфологические изменения в органах собак, экспериментально зараженных Тохосага canis.

Определены специфичность, активность иммунореагентов из личинок Тохосага canis и чувствительность, информативность РНГА при экспериментальном токсокарозе собак. При помощи реакции непрямой гемагглютинации с экскреторно-секреторными и соматическими личиночными антигенами токсокар изучен иммунный ответ в различные периоды болезни.

Выяснены гематологические показатели при экспериментальном токсокарозе собак с пятикратной дегельминтизацией фебантелом 10 %

гранулятом и альбендазолом 99,7 %. Разработана рациональная схема диагностических исследований и дегельминтизаций собак перед наступлением беременности, как этап оздоровительных мероприятий при токсокарозе.

Практическая значимость. Результаты изучения эпизоотологии токсокароза собак, разработанные параметры культивирования яиц Тохосага canis и получения экскреторно-секреторных, соматических антигенов личинок токсокар являются основой для усовершенствования диагностики и профилактики болезни.

Разработанные иммунореагенты рекомендуется использовать в изготовлении диалюстикумов для реакций непрямой гемагтлютинации и латексагглютинации. РНГА следует применять для обнаружения у собак до наступления беременности антител к личинкам Тохосага canis, мигрирующим и инкапсулированным в тканях.

Результаты испытания фебантела 10 % гранулята и альбендазола 99,7 % с целью профилактики токсокароза рекомендованы для включения в схему комплексных профилактических и оздоровительных мероприятий при паразитарных болезнях собак в питомниках служебного собаководства и в кинологических Центрах.

1. Распространение и особенности эпизоотологии токсокароза собак в г. Костроме.

2. Разработка параметров культивирования яиц Тохосага canis и получения экскреторно-секреторных, соматических личиночных антигенов токсокар с последующим использованием их в иммунодиагностических тестах (РНГЛ, РЛА).

3. Специфичность и активность иммунорсагентов для диагностики экспериментального токсокароза собак в реакциях непрямой гемагглютинации и латекса1 глютинации, информативность методов.

4. Гематологические показатели при экспериментальном токсокарозе собак в различные периоды инвазии и после дегельминтизации фебантелом и альбендазолом.

5. Патоморфологические изменения в органах экспериментально зараженных токсокарами собак.

Пути реализации. Результаты исследований можно включить в схему научно-обоснованных профилактических и оздоровительных мероприятий при токсокарозе плотоядных и в учебно-методическую литературу для ветеринарных специалистов и студентов факультетов ветеринарной медицины вузов.

1. Международная конференция молодых ученых «Молодая наука — XXI веку». — Иваново. — 2001 г.

2. Межвузовские научно-практические конференции «Актуальные проблемы науки в АПК». — Кострома. — 2002,2004.

3. Научная конференция «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». — Москва. — 2004.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 научных работ. В них изложены основные положения и выводы по изучаемой проблеме.

Внедрение. Результаты исследований в 2001-2003 годах с положительным эффектом апробированы в кинологическом Центре УВД Костромской области. В соавторстве подготовлены и утверждены научно-техническим советом факультета ветеринарной медицины и зоотехнии, ученым советом ФГОУ ВПО «Костромская государственная сельскохозяйственная академия» наставление и технические условия на набор для диагностики токсокароза собак в реакции непрямой гемагглютинации (2004 г.).

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 119 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора и списка литературы, собственных исследований, включающих материалы и методы, 4 главы, обсуждение полученных результатов, выводы, практические предложения. Библиографический список представлен 179 источниками, из них отечественных — 60, иностранных — 119. Работа иллюстрирована 26 таблицами и 22 рисунками.

Содержание диссертации, кандидата ветеринарных наук, Михин, Александр Германович

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Распространение и особенности эпизоотологии токсокароза плотоядных

1.2. Патогенез: гематологические, биохимические и патоморфологические изменения при экспериментальном токсокарозе

1.3. Иммунодиагностика токсокароза. Антигены и способы их получения. Методы диагностики

1.4. Лечение и химиопрофилактика токсокароза плотоядных

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2.1. Эпизоотология токсокароза собак в г. Костроме и в ряде населенных пунктов Костромского, Красносельского районов

2.2.1.1. Особенности эпизоотического процесса при токсокарозе в городской и сельской популяциях собак

2.2.1.2. Сезонная динамика токсокароза собак

2.2.1.3. Показатели зараженности токсокарами собак разного возраста

2.2.2. Изучение патогенного действия и патоморфологических изменений в органах при токсокарозе (однократное заражение и суперинвазия)

2.2.2.1. Симптомы, гематологические показатели и патоморфологические изменения при экспериментальном токсокарозе собак

2.2.2.2. Симптомы, гематологические показатели и патоморфологические изменения в тканях собак при суперинвазии Т. canis (дозы от 500 до 2500)

2.2.3. Иммунодиагностика токсокароза собак. Разработка иммунореагентов для реакции непрямой гемагглютинации (РНГА), латексагглютинации (PJIA) и использование их в диагностике токсокароза

2.2.3.1. Получение компонентов для изготовления экскреторно-секреторных, соматических, кутикулярных антигенов Toxocara canis с целью применения в РИГА и РЛА

2.2.3.2. Параметры изготовления экскреторно-секреторного, соматического антигенов из личинок второй стадии Toxocara canis и кутикулярного антигена из половозрелых токсокар

2.2.3.3. Результаты апробации РИГА и РЛА с экскреторно-секреторным, соматическим личиночным и кутикулярным антигенами Toxocara canis

2.2.3.4. Сопоставление результатов серологического и копроовоскопического исследований собак (щенных сук) на токсокароз

2.2.3.5. Динамика антител к Toxocara canis при экспериментальном токсокарозе собак в сыворотке крови и молоке лактирующей суки

2.2.4. Изучение влияния антгельминтных препаратов фебантела и альбендазола на собак, спонтанно и экспериментально зараженных токсокарами

2.2.4.1. Изменение параметров крови собак спонтанно и экспериментально зараженных токсокарами и дегельминтизированных фебантелом и альбендазолом

2.2.4.2. Эффективность антгельминтных препаратов при токсокарозе собак

2.2.4.3. Динамика титров антител в реакции непрямой гемагглютинации у собак, экспериментально зараженных инвазионными яйцами Toxocara canis и дегельминтизированных фебантелом 10 % гранулятом и альбендазолом 99,7 %

3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Архипов И. А. Особенности применения и дозирования антгельминтиков на разных видах животных// Тр. ВИГИС. 2002. — Т. 38. — С. 19-36.

2. Бене Ф. Обзор антгельминтных средств, применяемых у плотоядных// Ветеринар. 1999.- № 5-6. — С. 4-9.

3. Березанцев Ю.А., Кривенко В.В. Эпидемиологические особенности токсокароза человека в условиях Ленинграда// Тезисы докладов 9 съезда Всесоюзного общества гельминтологов. Москва. — 1986. — С. 41-46.

4. Беспалова Н.С. Этиопатогенетическая терапия гельминтозов (на примере токсокароза собак)// Автореф. дис. . д-ра вет. наук. Нижний Новгород. -2003.-53 с.

5. Бондарева В.И., Диков Г.И. Семена тыквы как противоцестодное средство у собак// Ветеринария, 1954, — №4, — С. 23.

6. Борзунов Е.Н. Эпизоотология токсокароза собак городской и сельской популяции в условиях Нижегородской области и усовершенствование мер борьбы с ним// Автореф. дис. . канд. вет. наук. Иваново.- 2002. — 24 с.

7. Бурей М.Л., Тэлэмбуца Н.Н. Инвазированность собак ассоциацией возбудителей гельминтов// Сб. науч. статей. «Профилактика паразитарных болезней животных». Кишинев. — 1985. — С. 78-80.

8. Верета Л. Е., Малышкова О.Г. Обсемененность почвы яйцами токсокар в детских дошкольных учреждениях Москвы и ее источники// Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 1984. — № 1. — С. 19-25.

9. Вибе П.П., Тищенко В.В. Инвазированность собак кишечными гельминтами// Вестник с/х науки. Алма-Ата. — 1970. — № 3. — С. 13-18.

10. Воличев А.Н. Эколого-эпизоотологические аспекты профилактики основных паразитозов домашних плотоядных в условиях мегаполиса Москвы// Автореф. дис. . канд. вет. наук. М. — 2000. — 20 с.

11. Волков Ф.А., Апалькин В.А., Волков К.Ф. Противопаразитарные средства. Справочник. Новосибирск. — 1996. — 75 с.

12. Гаврилов А.А. Распространение гельминтов собак в ряде областей

13. Казахстана// Тр. Казахского НИВИ. 1973. — Т. 15. — С. 383-388.

14. Галат В.Ф., Бейдик О.А. Ассоциативные болезни собак в г. Киеве// Матер. IV съезда паразитоценологов Украины. 1996. — С. 37-38.

15. Гербильский B.JI. О способности мигрирующих личинок аскарид провоцировать клинические явления при бессимптомной инфекции// В кн.: Работы по гельминтологии. К 75-летию акад. К.И. Скрябина. М. — Изд. АН СССР, 1953.-С. 139-146.

16. Гербильский В. Л., Богданович В.В. Ларвальный аскаридоз как заболевание аллергического характера// Тр. гельминтологической лабор. АН СССР. 1959. — Т. 9. — С. 73-75.

17. Глумнев М.Т. Ягоды голубики, как средство дегельминтизации// Каракуль и звероводство. 1956. — № 1-3. — С. 56-57.

18. Давидянц В. А. Санитарно-гельминтологическая характеристика токсокароза и разработка комплекса мероприятий по профилактике и борьбе с ним (на примере Армянской ССР)// Автореф. дис. . канд. вет. наук. -Ереван. 1984.- 16 с.

19. Давыдов А.С., Смирнов Н.В., Стужина И.М. Гельминтофауна тонкого отдела кишечника собак Куйбышевской области// В кн.: Эпизоотология, профилактика и лечение заразных и незаразных заболеваний с.-х. животных в Куйбышевской области. 1977. — С. 21-23.

20. Даугалиева Э.Х. Иммунитет при гельминтозах// Тр. ВИГИС. 2000. — Т. 36. — С. 27-49.

21. Демидов Н.В. Антгельминтики в ветеринарии. М. — Агропромиздат, 1987.-318 с.

22. Ершов B.C., Наумычева М.И. Аллергия при аскаридозе свиней// Сб. докл. советских ученых к XVII междунар. ветерин. конгрессу. 1963. — С. 95-97.

23. Есаулова Н.В. Гельминтофауна домашних и диких плотоядных в условиях центральной зоны Нечерноземья и усовершенствование мер борьбы с основными гельминтозами// Автореф. дис. . канд. вет. наук. М. -2002.-17 с.

24. Есаулова Н.В., Акбаева М.Ш. Гельминтофауна собак и кошек в условиях г. Москвы и Московской области// Матер. Х-го междунар. вет. конгресса. -2001.-С. 235-236.

25. Жабров А.В. Гельминтозы собак на урбанизированных территориях Среднего Поволжья (эпизоотология и меры борьбы)// Автореф. дис. . канд. вет. наук. Нижний Новгород. — 2002. — 21 с.

26. Желева Р.Ц. Сравнительное исследование антигенной структуры Toxocara canis (Werner, 1782) Ascaris suum (Goes, 1782) в реакции иммунодиффузии и иммуноэлектрофорезе// Мед. паразитология и паразитарные болезни. 1975. — № 3. — С. 239-298.

27. Желева Р.Ц. Сравнительное изучение активности и специфичности антигенов Т. canis и A. suum в реакций непрямой гемагглютинации// Мед. паразитология и паразитарные болезни. 1*975. — № 4. — С. 455-460.

28. Желева Р.Ц. Оценка эффективности реакции непрямой гемагглютинации с антигеном аскарид и токсокар при диагностике симптомокомплекса «larva migrans» у человека// Мед. паразитология и паразитарные болезни. 1976 -№2.-С. 160-165.

29. Зубарева И.М. Основные гельминтозы домашних плотоядных в крупных городах (на примере г. Новосибирска)// Автореф. дис. . канд. вет. наук. -Новосибирск. 2001. — 22 с.

30. Зурмийски П. Изучение распространения Toxocara canis среди собак и опыт лечения токсокароза фенбендазолом// Ветер, сб. 1983. Т. 81, № 12. -С. 21-25.

31. Зыкин J1.A., Сутягин B.C., Угрин И.Н. О применении пиперазин -адипината для дегельминтизации плотоядных животных при аскаридозах// Ветеринария. 1964. — № 8. — С. 53.

32. Игнатьева В.Б. Изучение гельминтофауны собак в Башкортостане //Матер, конф. ВОГ «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». М. — 2001. — С. 101-102.

33. Игнашенкова Г.В. Биохимическое изучение антигеннной структуры

34. T.canis: Дис. канд. биол. наук. М. — 1985. — 174 с.

35. Исмаилов Г. Д. Гельминтофауна собак в Азербайджане, ее эпизоотологическая и эпидемиологическая характеристика// Автореф. дис. . канд. биол. наук. Баку. — 1969. — 20 с.

36. Калюжный С.И. Кишечные паразитозы собак и меры борьбы при микстинвазии (токсокароз цистоизоспороз) у щенков// Автореф. дис. . канд. вет. наук. Саратов. — 2000. — 22 с.

37. Карасев Н.Ф., Никулин Т.Г., Янченко А.Е. Гельминты и гельминтозы собак г. Витебска// Труды Ленинградского вет. и-та. 1986. — Вып. 48. — С. 101-104.

38. Клочков С.Д. Основные гельминтозы городской популяции собак, их санитарно-эпидемиологическое значение и меры борьбы с ними// Автореф. дис. . канд. вет. наук. Саратов. — 1995. — 18 с.

39. Козырева Т.Г. Эколого-эпидемиологические основы профилактики токсокароза в Дальневосточном регионе России// Автореф. дис. . канд. вет. наук. М. — 1999.- 18 с.

40. Котельников Г.А. Гельминтологические исследования животных и окружающей среды. Справочник. — М. — Колос, 1984. — С. 21-35.

41. Лейкина Е.С., Демина Н.А., Матова Е.Е., Зорихина В.И., Зубкова А.С. Исследование по патогенезу и иммунитету при ранней фазе аскаридоза//Тр. ин-та мед. паразит, и троп. мед. им. Е.И. Марциновского. 1959. — С. 470502.

42. Лейкина Е.С. Заболевания человека, вызванные миграцией личинок нематод животных. (Обзор зарубежной литературы). //Мед. паразитол. и паразитарн. болезни. 1962. — № 1. — С. 100-104.

43. Лысенко. А. Я., Константинова Т.Н., Авдюхина Т.Н. Токсокароз. Учеб. пособие. М. — 1999. — 40 с.

44. Москалик Р.С., Бакулов К.В. Гельминты и дрожжеподобные грибы у служебных собак г. Кишинева// Паразиты теплокровных животных Молдавии. Кишинев. -1976. — С. 35-40.

45. Мысливец Ю.Э., Цветова Ю.В., Цветова Г.В, Токсокароз в Кузбассе// Новости «Вектор-Бест». 1998. — № 8. — С. 3.

46. Петров A.M., Налетов Н.А. Токсокароз почек лисиц// Тр. Моск. зоопарка. -Т. 4.- 1949.-С. 282-287.

47. Подушкина М.А. Токсаскаридоз собак и голубых песцов разработка профилактических мероприятий// Автореф. дис. . канд. вет. наук. Уфа. -2000. — 22 с.

48. Полищук В.И. К гельминтофауне тонкого отдела кишечника собак Центрального и Южного Таджикистана// Тр. Таджикского НИИВИ. 1974. -Т. 4.-С. 170-172.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата ветеринарных наук, Михин, Александр Германович, Кострома

Токсокароз широко распространен среди собак во многих странах мира (P.M. Schantz, 1989).

В крупных городах наблюдается непрерывный рост численности плотоядных. Инвазированные животные контаминируют окружающую среду яйцами токсокар. Яйца и личинки гельминтов проникают в организм специфических и неспецифических хозяев алиментарно, при каннибализме, трансплацентарно и трансмаммарно.

В различных регионах России токсокароз регистрируется у 10-76 % собак (Ф.Л. Радун, 1973, С.Д. Клочков, 1995, Ю.Э. Мысливец и др., 1998, А.Я. Лысенко и др., 1999, А.Н. Шинкаренко, 1999, Т.Г. Козырева, 1999, А.Н.Воличев, 2000, С.И. Калюжный, 2000, Н.В. Есаулова, М.Ш. Акбаев, 2001, В.Б. Игнатьева, 2001, И.М. Зубарева, 2001, А.В. Жабров, 2002, Н.С. Беспалова, 2003).

Щенки от 2 до 30 дней заражены токсокарами на 100 %. Высокая напряженность эпизоотического процесса является следствием пожизненного носительства личинок Toxocara canis и трансплацентарной передачей их во второй половине беременности (Л.Е. Верета, О.Г. Малышкова, 1984).

Токсокароз — зооноз. Зараженные собаки представляют эпидемическую опасность. Патологические изменения в тканях людей, вызванные личинками токсокар, известны под названием синдрома «larva migrans» (Г.А. Котельников, 1984, Ю.А. Березанцев, В.В. Кривенко, 1986).

Установлено, что личинки токсокар при миграции проникают в капилляры легких, затем в большой круг кровообращения, центральную нервную систему, обусловливая патологические процессы в головном мозге (К.И. Скрябин, A.M. Петров, 1964).

В Болгарии зарегистрировано 723 больных с мигрирующими личинками токсокар. Описан случай менингита, индуцированный Toxocara canis (R. Jeleva et al., 1998).

Известны две формы токсокароза человека: висцеральный и глазной. Заболевание протекает с рецидивами и длительными ремиссиями (JI.C. Ходасевич и др., 1998).

В России и за рубежом для сероэпидемиологического обследования на токсокароз предложен иммуноферментный метод и другие иммунодиагностические тесты. Антитела к личинкам токсокар обнаруживают в сыворотках крови людей при помощи тест систем для ИФА «Тиаскар» (НПО «Вектор Бест», г. Новосибирск).

До настоящего времени недостаточно изучены особенности эпизоотологии, патогенез ларвального токсокароза собак, патоморфологические изменения в тканях, продолжительность персистенции и сохранения инвазионных свойств личинок токсокар у взрослых плотоядных.

За рубежом с 60-70 гг. прошлого столетия применяются различные диагностические тесты для выявления ларвального токсокароза.

В отечественной ветеринарной практике отсутствуют эффективные методы иммунодиагностики «larva migrans» при токсокарозе плотоядных.

В качестве источника антигена при иммунодиагностике ларвального токсокароза можно использовать взрослые особи Toxocara canis (С.С. Huntley et al., 1963, E.I. Jeska, 1967, R.F. Collins et al., 1975), личинки второй и третьей стадий (J.N. Annen et al., 1975), экскреторно-секреторные продукты личинок (D.H. Savigny, 1975, К. Matsumura et al., 1983).

В работах отечественных и иностранных исследователей подчеркивается трудность, длительность и невысокая эффективность лечения синдрома «larva migrans» у человека и животных (Н. Тумальская, 1997, А.Н. Воличев, 2000, S. Coman et al., 2000).

Актуальным для ветеринарной практики является научное обоснование комплексных профилактических и оздоровительных мероприятий при токсокарозе собак в питомниках служебного собаководства и в кинологических Центрах, включающих диагностические исследования и дегельминтизации сук перед наступлением беременности.

Цель и задачи исследований. Изучить особенности эпизоотологии токсокароза собак в г. Костроме, патоморфологические изменения в органах экспериментально зараженных токсокарами собак, разработать диагностические препараты из антигенов личиночных стадий Toxocara canis и адаптировать их для реакций непрямой гемагглютинаций и латексагглютинации.

1. Изучить распространение, сезонную динамику и возрастные аспекты эпизоотологии токсокароза собак в г. Костроме, Костромском и Красносельском районах.

2. Разработать параметры культивирования яиц и получения экскреторно-секреторных и соматических антигенов личиночных стадий Toxocara canis.

3. Определить специфичность и активность иммунореагентов из личиночных стадий Т. canis, установить чувствительность, информативность РНГА и динамику антител при экспериментальном токсокарозе собак.

4. Изучить гематологические показатели при экспериментальном токсокарозе собак в различные периоды инвазии после дегельминтизации фебантелом и альбендазолом.

5. Выяснить патоморфологические изменения в органах экспериментально зараженных токсокарами собак.

Научная новизна работы. Впервые изучено распространение токсокароза среди собак в г. Костроме. Установлены сезонная динамика, возрастные аспекты эпизоотологии токсокароза, уровень зараженности в городских и сельских условиях, гематологический статус и патоморфологические изменения в органах собак, экспериментально зараженных Toxocara canis.

Определены специфичность, активность иммунореагентов из личиночных стадий Toxocara canis и чувствительность, информативность РНГА при экспериментальном токсокарозе собак. При помощи реакции непрямой гемагглютинации с экскреторно-секреторными и соматическими личиночными антигенами токсокар изучен иммунный ответ в различные периоды болезни.

Выяснены гематологические показатели при экспериментальном токсокарозе собак с пятикратной дегельминтизацией фебантелом 10 % гранулятом и альбендазолом 99,7 %. Разработана рациональная схема диагностических исследований и дегельминтизации сук перед наступлением беременности, как этап оздоровительных мероприятий при токсокарозе.

Практическая значимость. Результаты изучения эпизоотологии токсокароза собак, разработанные параметры культивирования яиц Тохосага canis и получения экскреторно-секреторных, соматических антигенов личинок токсокар являются основой для усовершенствования диагностики и профилактики болезни.

Полученные иммунореагенты рекомендуется использовать в изготовлении диагностикумов для реакции непрямой гемагглютинации. РНГА следует применять для обнаружения у сук до наступления беременности антител к мигрирующим и инкапсулированным в тканях личинкам Тохосага canis.

Результаты испытания фебантела 10 % гранулята и альбендазола 99,7 % с целью профилактики токсокароза рекомендованы для включения в схему комплексных профилактических и оздоровительных мероприятий при паразитарных болезнях собак в питомниках служебного собаководства и в кинологических Центрах.

1. Распространение и особенности эпизоотологии токсокароза собак в г. Костроме;

2. Разработка параметров культивирования яиц Тохосага canis и получения экскреторно-секреторных, соматических личиночных антигенов токсокар с последующим использованием их в иммунодиагностических тестах (РНГА, PJIA);

3. Специфичность и активность иммунореагентов для диагностики экспериментального токсокароза собак в реакциях непрямой гемагглютинации и латексагглютинации, информативность методов;

4. Гематологические показатели при экспериментальном токсокарозе собак в различные периоды инвазии и после дегельминтизации фебантелом и альбендазолом;

5. Патоморфологические изменения в органах экспериментально зараженных токсокарами собак.

Пути реализации. Результаты исследований можно включить в схему научно-обоснованных профилактических и оздоровительных мероприятий при токсокарозе плотоядных и в учебно-методическую литературу для ветеринарных специалистов и студентов факультетов ветеринарной медицины вузов.

1. Международная конференция молодых ученых «Молодая наука — XXI веку». — Иваново. — 2001 г.

2. Межвузовские научно-практические конференции «Актуальные проблемы науки в АПК». — Кострома. — 2002, 2004.

3. Научная конференция «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». — Москва. — 2004.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 научных работ. В них изложены основные положения и выводы по изучаемой проблеме.

Внедрение. Результаты исследований в 2001-2003 годах с положительным эффектом апробированы в кинологическом Центре УВД Костромской области. В соавторстве подготовлены и утверждены научно-техническим советом факультета ветеринарной медицины и зоотехнии, ученым советом ФГОУ ВПО «Костромская государственная сельскохозяйственная академия» наставление и технические условия на набор для диагностики токсокароза собак в реакции непрямой гемагглютинации (2004 г.).

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 119 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, включающих материалы и методы и 4 главы, обсуждения результатов, выводов, практических предложений и списка литературы. Библиографический список представлен 179 источниками, из них отечественных — 60, иностранных — 119. Работа иллюстрирована 26 таблицами и 22 рисунками.

50. Радун Ф.Л. Вопросы эпизоотологии и профилактики токсокароза собак, песцов и серебристо-черных лисиц в условиях Московской области// Автореф. дис. . канд. вет. наук. М. — 1973. — 18 с.

51. Ратникова И.Н. Иммунобиологические показатели при токсокарозе собак и методы его коррекции// Автореф. дис. . канд. вет. наук. Нижний Новгород. — 2002. — 20 с.

52. Скрябин К.И., Петров A.M. Основы ветеринарной нематодологии. М. -Колос, 1964.-С. 210-225.

53. Слепнев Н.К. К изучению гельминтофауны собак в некоторых зонах Белоруссии //Тр. Белорус. НИВИ. .1974.- Т. 12. — С. 122-125.

54. Смирнов Г.Г. К вопросу о патологических изменениях при миграции аскаридных личинок в теле хозяина// Изв. АН СССР. Ч. 1.- 1927. — С. 12751298.

55. Смирнов Г.Г., Глазунов М.Ф. Об изменениях крови морской свинки при однократной и повторной аскаридной инвазии// Вестн. микроб., эпид. и параз. Т. 7. — Вып. 1. — 1928. — С. 1-26.

56. Сосипатрова Л.А. Патоморфологические изменения в организме свиней при миграции личинок Ascaris suum, Ascaris lumbricoides и Toxocara canisпри однократном заражении и суперинвазии: Дис. канд. вет. наук.- М. -1968.- 178 с.

Заключение Диссертация по теме «Паразитология», Михин, Александр Германович

ВЫВОДЫ

1. Токсокароз зарегистрирован в г. Костроме, Костромском и Красносельском районах в среднем у 12±1,3 % собак. Щенки 1-5 мес. заражены токсокарами на 21±7,1 — 41 ±5,8 %, собаки до одного года — 6±3,2 -8±2,3 %, 1-3 лет — 7±2,7 %; животные старше 3 лет свободны от имагинальных форм Тохосага canis.

2. Сезонная динамика токсокароза собак характеризуется повышением интенсивности эпизоотического процесса в летний период. Средний показатель экстенсивности инвазии — 22±3,2 %. Осенью и зимой зараженность токсокарами составляет 3-4±1,7 %.

3. При экспериментальном токсокарозе собак (дозы заражения от 150 до 2500 яиц, Т. canis) установлены следующие патоморфологические изменения в кишечнике, печени, легких: воспаление с выраженной клеточной пролиферацией (эозинофилы, макрофаги, плазмоциты), альтерация и некроз с замещением фибробластами;

4. Оптимальные параметры культивирования яиц Toxocara canis: температура — 23-25°С, субстрат — очищенный мелкий песок и древесные опилки, периодически увлажняемые водой. Завершение формирования личинок и проявление активности наблюдается через 25-30 дн. при культивировании яиц, выделенных из матки токсокар, и на 4-5 мес. — при получении их из фекалий собак.

5. Изучение антигенов токсокар в реакциях непрямой гемагглютинации и латексагглютинации позволило установить наиболее оптимальные показатели специфичности, активности экскреторно-секреторных личиночных компонентов (титр антител — 1:2560 с позитивной контрольной сывороткой) и соматических личиночных антигенов (титр антител — 1:6401:1280). Кутикулярный антиген имагинальных форм Toxocara canis показал в РНГА и PJLA неспецифические результаты.

6. Разработанные иммунореагенты адаптированы для серологических методов диагностики ларвального токсокароза — РНГА и РЛА. Иммунодиагностические тесты следует применять для выявления антител к ларвальным стадиям Т. canis. В опытах на 40 спонтанно и экспериментально зараженных яйцами токсокар собаках подтверждены высокие показатели специфичности и чувствительности РНГА с экскреторно-секреторными и соматическими антигенами личинок второй стадии Т. canis, максимальные титры антител соответственно — 1:2560 и 1:640.

7. Пятикратная (с интервалом 3-5 дн.) дегельминтизация фебантелом 10 % гранулятом и альбендазолом 99,7 % собак, экспериментально зараженных яйцами токсокар, способствует постепенному восстановлению гематологических показателей. Однако уровень эритроцитов, гемоглобина и лейкоцитов еще длительный период (более 45 дней) остается ниже нормативных показателей на 28 % и более.

8. Экстенсэффективность антгельминтных препаратов фебантела 10 % грану лята и альбендазол а 99,7 % при спонтанном и экспериментальном токсокарозе собак (против имагинальных форм Т. canis) составляет 100 %.

Разработаны параметры культивирования яиц Т. canis и получения экскреторно-секреторных и соматических антигенов из личинок токсокар второй стадии.

Полученные иммунореагенты рекомендуется использовать для сенсибилизации эритроцитов и последующего приготовления диагностикумов для реакции непрямой гемагглютинации.

РНГА следует применять для обнаружения у собак до наступления беременности антител к мигрирующим и инкапсулированным в тканях личинкам Toxocara canis.

При положительных результатах РНГА на токсокароз собак предлагается трех- или пятикратно с интервалом 3-5 дн. дегельминтизировать фебантелом 10% гранулятом или альбендазолом 99,7 % в дозе 15 мг/кг. Эффективность лечения необходимо определять по снижению уровня антител к Т. canis и серонегативным результатам на токсокароз через 15-30 дней после дегельминтизации.

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Adblock detector